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培養(yǎng)基制備原則和要求

2011/5/3 [2093]

培養(yǎng)基制備原則和要求

(一)培養(yǎng)基必須含有細(xì)菌生長繁殖所需要的營養(yǎng)物質(zhì)。所用的化學(xué)藥品必須純凈,稱取的份量務(wù)必準(zhǔn)確。
(二)培養(yǎng)基的酸堿度應(yīng)符合細(xì)菌生長要求。按各種培養(yǎng)基要求準(zhǔn)確測定調(diào)節(jié)pH值。多數(shù)細(xì)菌生長的適宜pH值為7.2~7.6,呈弱堿性。
(三)培養(yǎng)基的滅菌時(shí)間和溫度,應(yīng)按照各種培養(yǎng)基的規(guī)定進(jìn)行,以保證滅菌效果及不損失培養(yǎng)基的必需營養(yǎng)成分。培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后,必須置37℃溫箱中培養(yǎng)24小時(shí),無菌生長者方可應(yīng)用。

(四)所用器皿須潔凈,忌用鐵或鋼質(zhì)器皿,要求沒有抑制細(xì)菌生長的物質(zhì)存在。
(五)制成的培養(yǎng)基應(yīng)該是透明的,以便觀察細(xì)菌生長性狀以及其他代謝活動(dòng)所產(chǎn)生的變化。
二、培養(yǎng)基制備過程
不同的培養(yǎng)基其制備方法也不同,一般包括以下步驟:
(一)準(zhǔn)確稱量試劑 根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值 將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線,加熱溶解,補(bǔ)充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計(jì)測定。用1N
NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
(三)過濾 將玻璃漏斗置鐵架上,再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝 將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。
(五)滅菌
培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng),殺菌效果好。

高壓蒸汽滅菌,一般采用15磅/平方(即1.05kg/cm2)壓力,此時(shí)的溫度是121.3℃。滅菌20~30分鐘后,可達(dá)到*滅菌的目的。在進(jìn)行滅菌的時(shí)候,首先要把滅菌鍋內(nèi)的冷空氣排出,否則,冷空氣存在會(huì)降低鍋內(nèi)的實(shí)際溫度,影響滅菌效果。

 

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