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改良Lowry法蛋白定量試劑盒

2011-04-22 [2348]

改良Lowry法蛋白定量試劑盒

許多年來Lowry法是zui常用也是被引用次數(shù)zui多的蛋白質(zhì)定量方法。其原理是在堿性條件和福林酚Folin-Ciocalteu Reagent存在下,銅離子與蛋白質(zhì)形成可溶性蘭色復(fù)合物,在750 nm有zui大光吸收值。Lowry法的優(yōu)點是靈敏度高,對脂質(zhì)、SDS等干擾物質(zhì)不甚敏感。經(jīng)典Lowry法的主要缺點是,每次蛋白定量之前必須用兩種不同的試劑A和B (Reagent A and B)新鮮配制堿性銅試劑(Reagent C)。堿性銅試劑(Reagent C)不穩(wěn)定因而必須每天新鮮配制;另外,經(jīng)典Lowry法產(chǎn)生的蛋白顏色復(fù)合物穩(wěn)定性較差,在反應(yīng)20-120分鐘內(nèi)變化9.2%;蛋白濃度低于15μg/ml時標準曲線的重復(fù)性較差;本試劑盒采用改良的Lowry法,用單一添加有穩(wěn)定劑的堿性銅試劑代替經(jīng)典Lowry法的試劑A、試劑B、和試劑C。這種改良堿性銅試劑在室溫下穩(wěn)定12個月以上;測定反應(yīng)產(chǎn)生的銅蛋白-藍色復(fù)合物相當穩(wěn)定,在2小時內(nèi)的變化不超過0.3%;反應(yīng)曲線幾乎100%與原有方案吻合,重復(fù)性佳。因而改良Lowry法蛋白定量試劑盒與BCA法蛋白質(zhì)定量試劑盒一樣,具有非常好的試劑穩(wěn)定性、檢測靈敏度、和重復(fù)性,并且測定過程變得十分簡捷,是經(jīng)典Lowry法忠實用戶的理想選擇。

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