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哺乳動物細胞的RNAi技術策略目前RNAi技術已經(jīng)進入了生物科學研究的許多領域，成為了一種主要的生物學研究工具，發(fā)展得相當迅速，并受到了此次諾貝爾獎評審委員會的青睞，獲得2006年諾貝爾獎醫(yī)學/生理獎。然而這一才歷經(jīng)十個年頭的技術依然對于許多研究人員來說還是很陌生的，以下是有關RNAi技術在哺乳動物細胞中應用的具體設計策略，主要來自于《遺傳》雜志2005年“RNA干涉（RNAi）技術應用于哺乳動物細胞的研究策略”，希望能給從事或者準備從事RNAi相關實驗的研究人員以幫助。哺乳...

生物素-親和素系統(tǒng)（BAS）ELISA和免疫組化技術20世紀70年代后期在免疫酶技術中利用生物素-親和素系統(tǒng)（biotin-avidinsystem，BAS）標記抗體發(fā)展了又一種新型生物反應放大技術，即BAS-ELISA技術，它使用生物素-親和素-過氧化物酶復合物作為指示劑，組成一新的生物放大系統(tǒng)進一步提高檢測的敏感度。生物素（biotin）是廣泛分布于動植物體內(nèi)的一種生長因子，又稱輔酶R或維生素H。親和素（avidin）是卵白及某些微生物中的一種蛋白質(zhì)，由4個亞單位組成。二...

PCR-ELISA法診斷禽流感PCR-ELISA是將一步RT-PCR技術與酶聯(lián)免疫吸附法相結(jié)合，檢測病毒的一項診斷技術。PCR的一對引物中，其中一個用生物素標記、另一個用地高辛標記，在酶標微孔板上用親和素包被，PCR擴增后純化片段加入微孔板中。此時，微孔板上包被的親和素將與生物素標記引物上的生物素特異性結(jié)合而捕捉了PCR片段，然后在微IL板中加入辣根過氧化物酶標記的抗地高辛抗體，該抗體將與地高辛標記引物上的地高辛結(jié)合，從而形成親和素-生物素-PCR片段-地高辛-地高辛抗體-辣...

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）診斷豬囊尾蚴病病目前實驗室開發(fā)的新型檢測方法主要是以ELISA及改良的ELISA為主。分別用5種不同改良的ELISA平行檢測囊蟲抗體：ABC-ELISA、經(jīng)典ELISA、SPA-ELISA、快速法ELISA和BAELISA，試驗結(jié)果差異不顯著，說明方法學的選擇主要依據(jù)習慣和試驗的目的。N．S．Odashima（2002）用ELISA法診斷不同的患者群血清中抗體的種類，發(fā)現(xiàn)ELISA—lgG敏感度zui高，分別達到88．5％和93．2％，這說明該方...

酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA操作中標本的收集用于ELISA測定的臨床標本zui為常用的是血清（漿），有時因為特定的檢測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。目前使用血清（漿）標本測定的標志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等。對用于激素和治療藥物測定的血清標本的收集，要注意收集時間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4：00—6：00之間，會有一峰值出現(xiàn)；生長激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)...

酶標抗體的質(zhì)量鑒定與保存1．酶活性和抗體效價測定采用雙向免疫擴散法（稀釋抗體）和DAB-H2O2顯色反應檢測結(jié)合物中抗體效價和免疫沉淀線中的酶促反應。2．酶量和IgG量酶量（mg/ml）=OD403′0.4IgG量（mg/ml）=（OD280-OD402′0.42）′0.94′0.62其中，0.42為酶蛋白本身（0.3）及結(jié)合戊二醛后增加的OD值，0.94為抗體蛋白與醛化酶結(jié)合后，OD280約增加6%，故乘以0.94。兔IgG的OD280=1.0時為0.62.過碘酸鈉標記法I...